即將迎來(lái)2020年的春節(jié)，然而，一個(gè)冰冷的代號(hào)決意要在這節(jié)日期間印下越來(lái)越深的烙印。2019-nCoV，或者稱(chēng)“2019新型冠狀病毒”正在引起一場(chǎng)來(lái)勢(shì)洶洶的肺炎疫情。

根據(jù)官方公布的信息，2019-nCoV屬于冠狀病毒中的一種，其遺傳物質(zhì)為正鏈ssRNA，基因組大小為30kb。該類(lèi)病毒部分感染人，部分感染哺乳動(dòng)物及鳥(niǎo)類(lèi)。極少數(shù)情況下（如SARS、MERS）會(huì)從動(dòng)物傳染到人群中，并且流通狀況復(fù)雜難以預(yù)測(cè)。截至目前，這種新型肺炎已被納入乙類(lèi)傳染病、采取甲類(lèi)管理措施。20日，國(guó)家衛(wèi)健委發(fā)布動(dòng)態(tài)，下發(fā)新型冠狀病毒核酸檢測(cè)試劑盒，要求各地加強(qiáng)檢測(cè)，全力救治患者，及時(shí)發(fā)布確診病例及疫情防控信息。

早期診斷是阻斷病毒傳播的關(guān)鍵。

根據(jù)世衛(wèi)組織（WHO）公布的第一版《針對(duì)疑似新型冠狀病毒感染造成嚴(yán)重急性呼吸道感染的臨床處置指南》，RT-PCR是對(duì)臨床樣本進(jìn)行診斷的首選方式。同時(shí)建議對(duì)所有可疑病例進(jìn)行詳細(xì)的微生物學(xué)研究，因?yàn)椴慌懦c其他呼吸道病毒出現(xiàn)雙重感染的可能性。目前，病毒的相關(guān)基因組信息已經(jīng)在genebank(MN908947)公開(kāi)，同時(shí)WHO也發(fā)布了2019-nCoV的熒光定量PCR檢測(cè)指南供研究人員參考，無(wú)疑為當(dāng)前診斷體系的建立奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

TOYOBO致力于為各試劑盒廠家提供高性能，高性價(jià)比的診斷試劑原料，協(xié)助客戶開(kāi)發(fā)有競(jìng)爭(zhēng)力的診斷產(chǎn)品。

One-Step qRT-PCR探針?lè)z測(cè)試劑盒

本試劑盒是使用了高效率逆轉(zhuǎn)錄酶ReverTra Ace和PCR酶Tth DNA Polymerase的兩酶體系一步法熒光定量PCR試劑盒。通過(guò)將兩種酶與最優(yōu)化的buffer相組合，可以對(duì)微量RNA進(jìn)行迅速定量。適用于對(duì)RNA病毒及低表達(dá)量mRNA的定量。同時(shí)，不易受目的基因序列的影響，可高靈敏度地檢測(cè)出各種RNA。

貨號(hào)：QRZ-101

                  特征

• 卓越的檢測(cè)效率和靈敏度

• 特別適合多重（Multiplex）檢測(cè)體系

• 完全兼容快速反應(yīng)條件

• 適用于高GC、難擴(kuò)增的模板

• 適用于粗提樣本檢測(cè)

• 含有dUTP，可進(jìn)行UNG防污染

實(shí)驗(yàn)例

*1 縱軸RNA拷貝數(shù)為該病毒模板下能檢測(cè)的最低限，只有QRZ-101能在30 copy以下的模板量下得到一致的陽(yáng)性結(jié)果

*2 模板為human total RNA按10倍梯度稀釋?zhuān)瑱z測(cè)β-actin基因的表達(dá)量

*3 使用3種熒光染料標(biāo)記的TaqMan探針，分別進(jìn)行單重及三通道同時(shí)檢測(cè)，各基因檢測(cè)結(jié)果依次繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在同一坐標(biāo)系進(jìn)行比較

無(wú)論是各種病毒的最低檢測(cè)限還是檢測(cè)的熒光終值，QRZ-101都優(yōu)于同類(lèi)一步法試劑，并且在多重體系下具有和單重體系相同的檢測(cè)效果。

高效率逆轉(zhuǎn)錄酶ReverTra Ace

本產(chǎn)品是基于M-MLV改良的RNA逆轉(zhuǎn)錄酶，與野生型相比活性高出4倍。通過(guò)引入突變降低了酶本身的RNaseH活性，并且提高了高溫反應(yīng)性，從而高效率進(jìn)行cDNA合成。

貨號(hào)：TRT-101

         特征

• 去掉了RNaseH活性，延伸性能卓越

• 優(yōu)良的高溫反應(yīng)性

• 特別適用于RT-PCR

實(shí)驗(yàn)例

以檢測(cè)Flu病毒為例，模板拷貝數(shù)從10¹~10⁶數(shù)量級(jí)，THUNDERBIRD^?Probe One-step qRT-PCR Kit按標(biāo)準(zhǔn)體系進(jìn)行，T公司的逆轉(zhuǎn)錄酶從1U增加到 4U，定量效果依然到不到本試劑盒效果。

熱啟動(dòng)TTx DNA聚合酶（具逆轉(zhuǎn)錄活性）

TTx DNA Polymerase是基于Tth酶改造的DNA聚合酶，相比 TaqDNA polymerase，對(duì) GC-rich 目的片段及粗樣品的擴(kuò)增效率更出色，具有延伸速度快、抵抗PCR抑制劑能力強(qiáng)，且在Mn²⁺存在時(shí)具有逆轉(zhuǎn)錄活性等特點(diǎn)。本產(chǎn)品添加了熱啟動(dòng)抗體，實(shí)現(xiàn)了高特異性的PCR/RT-PCR，同時(shí)可兼容快速定量?jī)x器。

特征

• 相比Taq酶PCR靈敏度高，抗抑制能力強(qiáng)

• 不易受抑制物影響，可進(jìn)行血液直擴(kuò)

• 快速反應(yīng)條件

• 有可用于凍干（無(wú)甘油）的版本

實(shí)驗(yàn)例

左圖，使用TaqMan探針?lè)z測(cè)不同濃度流感病毒樣本。首先抽提RNA進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)?x10^2 ~ 1x10^8），以相同條件檢測(cè)比較同類(lèi)試劑盒檢測(cè)靈敏度。QRT為使用TTh酶的一步法定量試劑，可見(jiàn)HSTTX酶在處理實(shí)際樣本時(shí)效果最好。

右圖，使用快速條件檢測(cè)不同拷貝數(shù)（2500, 625, 156, 40, 10）的腸病毒樣本。即使在10 copy的模板濃度下依然能獲得真陽(yáng)性結(jié)果。

重組型RNA酶抑制劑

該RNA酶抑制劑產(chǎn)品來(lái)源于重組型人胎盤(pán)蛋白，通過(guò)非共價(jià)結(jié)合以1:1的比率使Rnases失活，特異地抑制RNase A, B, C以及人胎盤(pán)Rnase，不可抑制的核酸酶包括Rnase T1, S1 nuclease, Aspergillus來(lái)源的Rnase以及Rnase H。

特征

• 親和特異性與天然的Rnase抑制劑相同

• 純度高且不含核酸酶

• 可在較廣的pH范圍內(nèi)具有活性(pH 5-8)

實(shí)驗(yàn)例

通過(guò)qPCR比較不同公司RNA酶抑制劑的效果，從結(jié)果可知，使用TOYOBO RNA酶抑制劑時(shí)可得到更低的Ct值，效果與R公司相當(dāng)。

UNG酶

本品為熱敏型(Heat-labile) UNG酶(Uracil-DNA Glycosylase)，可以與dUTP聯(lián)合使用（QRZ-101中含有）去除qPCR檢測(cè)中從前序反應(yīng)帶來(lái)的的carry-over污染，避免因污染導(dǎo)致的假陽(yáng)性。該酶在55℃即可完全失活，不會(huì)影響后續(xù)PCR反應(yīng)。

特征

• 熱敏性，完美配合一步法試劑使用

• 有可用于凍干（無(wú)甘油）的版本

實(shí)驗(yàn)例

左圖，對(duì)比其他公司宣稱(chēng)的熱敏性產(chǎn)品，50℃ 10分鐘處理后，將各UNG酶與含有U的PCR產(chǎn)物混合后37度進(jìn)行溫育。只有TOYOBO的UNG在50度10分鐘處理后失去活性，沒(méi)有分解掉含有U的PCR產(chǎn)物。

右圖，比較了檢測(cè)腸病毒RNA時(shí)Ct值。使用TOYOBO的UNG條件時(shí)檢測(cè)靈敏度沒(méi)有問(wèn)題，使用其他公司的產(chǎn)品時(shí)Ct值出現(xiàn)了延遲。

  高性能熱啟動(dòng)抗體

（適用于Taq、TTh、TTx等酶）

anti-Taq high是針對(duì)Taq DNA聚合酶的單克隆中和抗體，使用抗體熱啟動(dòng)法可以有效抑制非特異性擴(kuò)增，增強(qiáng)PCR的特異性和靈敏度。在進(jìn)入PCR循環(huán)前的預(yù)變性階段，Taq酶的活性即被完全激活，使用起來(lái)方便快速。此外，可提供用于凍干的無(wú)甘油版本。

特征

• 可兼容Taq、Tth以及TTx酶，封閉效果好

• 使用簡(jiǎn)便，PCR反應(yīng)前和聚合酶混合即可實(shí)現(xiàn)熱啟動(dòng)

• 變性時(shí)間短，不影響酶在后續(xù)循環(huán)中的活性

• 有可用于凍干（無(wú)甘油）的版本

實(shí)驗(yàn)例

使用anti-Taq high配制Realtime PCR Master Mix（成品貨號(hào)：QPK-201）通過(guò)SYBR Green法檢測(cè)β-actin基因，測(cè)試其熱啟動(dòng)性能。結(jié)果顯示，即使在3個(gè)拷貝的低濃度，依然可以維持極佳的檢測(cè)能力。

截至目前，進(jìn)入我們視野的是不斷增多的確診和疑似病例，堅(jiān)守在一線的醫(yī)務(wù)工作者，各交通樞紐的檢疫人員，機(jī)構(gòu)、專(zhuān)家和媒體人士披露的信息。此外還有背后大量的研究人員，產(chǎn)業(yè)上下全力以赴，在為病原的鑒別、診斷和治療付出心血。更重要的是，我們每個(gè)人都重視起來(lái)并參與其中，積極防治，協(xié)力抗?fàn)帲_科學(xué)地對(duì)待這次事件才能讓病毒無(wú)處藏身。