內(nèi)參蛋白，你選對了嗎？
內(nèi)參蛋白是用來確保蛋白上樣量一致性，量化目的蛋白的表達情況，是免疫印跡（WB）和免疫熒光（IF）等實驗結(jié)果定量分析或定性比較的重要標尺。
內(nèi)參蛋白，你選對了嗎？
內(nèi)參蛋白主要是一些持家基因，這些持家基因執(zhí)行大量的基本功能，并持續(xù)在多種組織和細胞中高水平表達。 常見內(nèi)參蛋白包括Actin、Tubulin、GAPDH、Histone H3等。但是，研究不同類型的蛋白，對內(nèi)參的選擇是有講究的，如1）胞漿蛋白的內(nèi)參與胞核蛋白的內(nèi)參是不一樣的；2）在一定的實驗條件下，內(nèi)參蛋白的表達發(fā)生明顯的變化時需要選擇其他表達不變或者變化很小的蛋白；3）當研究的蛋白的分子量與內(nèi)參接近時，需要選擇分子量與目的蛋白的分子量差距比較大的蛋白等。
以下這張圖歸納了不同細胞組分對應的內(nèi)參及其分子量，掌握了這張圖，內(nèi)參選擇不再難。快動動你的手指收藏起來吧！
該圖來自CST Guide 科研寶典：《CST Guide: Pathways & Protocols》。
多數(shù)情況下，內(nèi)參蛋白的表達量很高且穩(wěn)定，但是，特定的實驗條件（環(huán)境壓力，外界因素刺激等）會引起這些內(nèi)參蛋白的變化，因此有些內(nèi)參在不同實驗條件或研究模型下不適合選擇，我們總結(jié)了最近研究的結(jié)果，列出有些實驗條件下不適的內(nèi)參供參考：
研究結(jié)腸癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移時，細胞骨架蛋白Vinculin不適合做全細胞的內(nèi)參。近期研究表明，結(jié)腸癌中Vinculin表達的減少和增加與致癌和轉(zhuǎn)移有關聯(lián)（1）。
在環(huán)境壓力下，HSP70和HSP90被誘導而表達發(fā)生變化，盡管HSP70和HSP90正常情況下是組成性表達的分子伴侶，能夠保持蛋白合成穩(wěn)態(tài)，但環(huán)境壓力下，HSP70和HSP90不適合胞漿蛋白的內(nèi)參（2）。
當細胞發(fā)生凋亡的時候，核多聚(ADP-核糖) 聚合酶PARP和核膜的結(jié)構組分Lamins，都不適合做核蛋白的內(nèi)參。在凋亡細胞體內(nèi),PARP是caspase-3裂解的主要靶蛋白之一(3)。Lamin A/C能夠被caspase-6切割，可以作為caspase-6激活的標志。在凋亡過程中，Lamin A/C能夠被特異地剪切成大片段(41-50 kDa)和小片段 (28 kDa)。Lamin的剪切會引起細胞核的失調(diào)和細胞死亡(4,5)。
VDAC(電壓依賴性陰離子通道) 廣泛表達，定位于線粒體外膜，通常認為這是代謝傳入或傳出線粒體的主要方式。另外，這個通道在凋亡信號中發(fā)揮重要作用。Bcl-2家族蛋白調(diào)控凋亡過程中線粒體通透性的改變，他們能結(jié)合VDAC改變通道的動力（6）。VDAC的同二聚體化可能是一種改變線粒體通透性和促進細胞色素C 釋放的機制。
Cofilin 屬于一組保守的小Actin-結(jié)合蛋白家族，在胞質(zhì)分裂，內(nèi)吞，胚胎發(fā)育，壓力應激和組織再生過程中發(fā)揮了關鍵作用。在刺激因素作用下，Cofilin作為提前存在的細絲促進Actin肌動蛋白絲的再生（7）。Cofilin的第3位絲氨酸被LIMK或TESK磷酸化后會抑制Cofilin的這種作用（8）。
Actin，一種廣泛表達的真核蛋白，是細胞骨架的重要組分。研究證明在原始乳腺癌細胞中Actin是高度磷酸化的（9）。研究也發(fā)現(xiàn)凋亡條件下體外和心臟肌肉以及骨骼肌中都能觀察到Actin的清除（10），因此，不適用于骨骼肌的樣品。Caspase-3對Actin的清除會加速泛素/蛋白酶體依賴的肌肉蛋白酶解（11）。 細胞生長條件的改變以及與胞外基質(zhì)組分的相互作用都可能會導致Actin蛋白合成的變化 。
GAPDH（甘油醛－3－磷酸脫氫酶）, 在糖酵解過程中將3-磷酸甘油醛進一步磷酸化。雖然在不同組織中的表達水平有差異，但GAPDH普遍被認為是一個組成型表達的持家蛋白。正是由于這個原因，GAPDH的mRNA和蛋白通常在對其它有變化的靶蛋白測定實驗時作為對照。當代謝信號通路受到影響時GAPDH 不適合做內(nèi)參等。
球形微管蛋白亞基包含微管建筑塊，由α/β-tubulin異源二聚體形成所有真核細胞的tubulin亞單位。 對抗微生物和抗有絲分裂藥物耐受性的不同而會導致Tubulin的表達發(fā)生變化 。
為了滿足你各種實驗的需要，CST 為您準備了含優(yōu)選貨號的內(nèi)參Sampler kit，性價比高，購買方便。
#4670 Loading Control Antibody Sampler Kit (HRP Conjugate)
#5142 Loading Control Antibody Sampler Kit
#9774 Loading Control Antibody Sampler Kit (Mouse)
內(nèi)參相關產(chǎn)品，請看下表：
|
Loadong Control |
No. |
Applications |
Reactivity |
|
Vinculin |
13901 |
W IHC-P F |
H M R Mk |
|
18799 |
W |
H M R Mk |
|
|
4650 |
W |
H M R Mk Dg |
|
|
HSP90 |
4877 |
W IHC-P IF-IC F |
H M R Mk (B) |
|
70657 |
F |
H M R Mk (B) |
|
|
79641 |
W |
H M R Mk (B) |
|
|
4874 |
W IHC-P |
H M R Mk Dm Z (C) (B) |
|
|
4875 |
W IHC-P F |
H M R Mk (B) |
|
|
HSP70 |
46477 |
W IHC-P |
H |
|
4873 |
W IP IHC-P IF-IC F |
H Mk |
|
|
4872 |
W IHC-P |
H M R Mk B |
|
|
4876 |
W |
H M R Mk |
|
|
HSP60 |
12165 |
W IHC-P IF-IC F |
H M R Hm Mk X Z B Pg (C) (Dg) (Hr) |
|
46611 |
W |
H M R Hm Mk X Z B Pg (C) (Dg) (Hr) |
|
|
56831 |
F |
H M R Hm Mk X Z B Pg (C) (Dg) (Hr) |
|
|
4869 |
W IF-IC F |
H M R Mk Dm |
|
|
4870 |
W IF-IC F |
H M R Mk Dm |
|
|
MEK1/2 |
13033 |
W |
H M R Mk Dm (Hm) (X) (Z) (B) (Dg) (Pg) (Ce) |
|
28708 |
F |
H M R Mk Dm (Hm) (X) (Z) (B) (Dg) (Pg) (Ce) |
|
|
4694 |
W IHC-P IF-IC F |
H M R Mk |
|
|
8727 |
W IF-IC F |
H M R Mk Dm (Hm) (X) (Z) (B) (Dg) (Pg) (Ce) |
|
|
9122 |
W IP |
H M R Mk Dm (C) (X) |
|
|
9126 |
W |
H M R Mk (Dg) |
|
|
GAPDH |
2118 |
W IHC-P IF-IC F |
H M R Mk B Pg (Pg) |
|
3683 |
W |
H M R Mk B Pg (Pg) |
|
|
3906 |
IF-IC F CS-CA |
H M R Mk B Pg (Pg) |
|
|
3907 |
IF-IC F |
H M R Mk B Pg (Pg) |
|
|
5014 |
W |
H M R Mk B Pg (Pg) |
|
|
5174 |
W IHC-P IF-IC |
H M R Mk (Pg) |
|
|
8884 |
W |
H M R Mk (Pg) |
|
|
97166 |
W |
H M R Mk |
|
|
PARP |
6704 |
IP |
H M R Mk |
|
9532 |
W IP IF-IC |
H M R Mk |
|
|
9542 |
W |
H M R Mk |
|
|
Lamin A/C |
4777 |
W IP IHC-P IF-F IF-IC F |
H M R Mk |
|
53496 |
F |
H M R Mk |
|
|
8617 |
IF-F IF-IC F |
H M R Mk |
|
|
2032 |
W IHC-P |
H M R (B) |
|
|
Lamin B1 |
12586 |
W |
H M R (Mk) (Pg) |
|
13435 |
W IP |
H M R (B) (Dg) (Pg) |
|
|
15068 |
W |
H M R (B) (Dg) (Pg) |
|
|
HDAC1 |
34589 |
W IP IF-IC ChIP |
H M R Mk |
|
5356 |
W IP |
H M R Mk |
|
|
59581 |
W |
H M R Mk |
|
|
2062 |
W |
H M R Mk |
|
|
TBP |
12578 |
W IP ChIP |
H Mk |
|
44059 |
W IP ChIP |
H M R Mk (C) (B) |
|
|
8515 |
W |
H M R Mk |
|
|
PCNA |
13110 |
W IP IHC-P IF-F IF-IC F |
H M R Mk |
|
2586 |
W IP IHC-P IF-IC F |
H M R Mk B Pg |
|
|
8580 |
IF-IC F |
H M R Mk B Pg |
|
|
HistoneH3 |
12167 |
F |
H M R Mk (Hm) (C) (Dm) (X) (Z) (B) |
|
12230 |
IF-IC F |
H M R Mk (Hm) (C) (Dm) (X) (Z) (B) |
|
|
5748 |
W |
H M R Mk (Hm) (C) (Dm) (X) (Z) (B) |
|
|
4620 |
ChIP |
H M (R) (Hm) (Mk) (C) (Dm) (X) (Z) (B) |
|
|
5192 |
W |
H M R Hm Mk Dm Z B Dg Pg |
|
|
12648 |
W |
H M R Mk (Hm) (C) (Dm) (X) (Z) (B) |
|
|
14269 |
W IHC-P IF-IC F ChIP |
H M R Mk |
|
|
3638 |
W |
H M R Mk (Dm) (X) (Hr) |
|
|
3680 |
IHC-P |
H (M) (R) (Mk) (Dm) (X) (Hr) |
|
|
4499 |
W IHC-P IF-IC F |
H M R Mk (Hm) (C) (Dm) (X) (Z) (B) |
|
|
82241 |
F CS-CA |
H M R Mk (Hm) (C) (Dm) (X) (Z) (B) |
|
|
9717 |
W |
H M R Hm Mk Dm Z B Dg Pg |
|
|
2650 |
ChIP |
H M (R) (Mk) (C) (Dm) (X) (Z) (B) (Hr) |
|
|
9715 |
W |
H M R Mk Z B Pg (Dm) |
|
|
VDAC |
12454 |
W |
H M R Mk |
|
4661 |
W |
H M R Mk |
|
|
4866 |
W IHC-P |
H M R B |
|
|
COX IV |
11967 |
W IP IHC-P IF-IC |
H M R Mk |
|
4850 |
W IP IHC-P IHC-F IF-IC F |
H R Mk Z B Pg |
|
|
4853 |
IF-IC F |
H R Mk Z B Pg |
|
|
5247 |
W |
H R Mk Z B Pg |
|
|
7561 |
IF-IC F |
H R Mk Z B Pg |
|
|
8692 |
IF-IC |
H R Mk Z B Pg |
|
|
8693 |
IF-IC |
H R Mk Z B Pg |
|
|
4844 |
W IP IHC-P F |
H M R Mk B |
|
|
α-Actinin |
12413 |
W |
H M R Mk (Z) |
|
6487 |
W IF-IC |
H M R Mk (Z) |
|
|
3134 |
W IF-IC |
H M R Hm Mk |
|
|
β-Actin |
12262 |
W |
H M R Hm Mk Dg |
|
12620 |
W |
H M R Mk (Hm) (C) (B) (Pg) |
|
|
3700 |
W IHC-P IF-IC F |
H M R Hm Mk Dg |
|
|
4970 |
W IHC-P IHC-F IF-IC F |
H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) |
|
|
5057 |
W F |
H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) |
|
|
5125 |
W |
H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) |
|
|
8046 |
IF-IC |
H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) |
|
|
8457 |
W IF-IC F |
H M R Mk (Hm) (C) (B) (Pg) |
|
|
8584 |
IF-IC F |
H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) |
|
|
8844 |
IF-IC F |
H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) |
|
|
9470 |
IF-IC |
H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) |
|
|
4967 |
W |
H M R Hm Mk Mi Dm Z B (C) (X) (Dg) (Pg) (Hr) |
|
|
α-Tubulin |
12351 |
W |
H M R Mk |
|
2125 |
W IHC-P IF-IC F |
H M R Mk Dm Z B Pg (Dg) |
|
|
3873 |
W IHC-P IF-IC |
H M R Mk |
|
|
4285 |
W |
H M R Mk Dm Z B Pg (Dg) |
|
|
5046 |
IF-IC F |
H M R Mk Dm Z B Pg (Dg) |
|
|
5059 |
IF-IC |
H M R Mk Dm Z B Pg (Dg) |
|
|
5063 |
IF-IC F CS-CA |
H M R Mk Dm Z B Pg (Dg) |
|
|
8058 |
IF-IC F |
H M R Mk |
|
|
9099 |
W |
H M R Mk Dm Z B Pg (Dg) |
|
|
2144 |
W IHC-P IF-IC F |
H M R Mk Dm B (X) |
|
|
β-Tubulin |
15115 |
W IHC-P IF-IC |
H M R Mk |
|
2128 |
W IHC-P IF-IC F |
H M R Mk Z B (C) |
|
|
3623 |
IF-IC F |
H M R Mk Z B (C) |
|
|
3624 |
IF-IC F |
H M R Mk Z B (C) |
|
|
5346 |
W |
H M R Mk Z B (C) |
|
|
56739 |
W |
H M R Mk |
|
|
2116 |
IF-IC |
H M R Mk Z B (C) |
|
|
6181 |
W |
H M R Mk Z B (C) |
|
|
7634 |
IF-IC |
H M R Mk Z B (C) |
|
|
86298 |
W IHC-P IF-IC |
H M R Hm Mk |
|
|
2146 |
W IHC-P IF-IC F |
H M R Mk Z B (X) |
|
|
Cofilin |
5175 |
W IF-IC |
H M R Mk Dg |
|
8503 |
W |
H M R Mk Dg |
|
|
3318 |
W |
H M R Mk B |
|
|
Profilin-1 |
3246 |
W |
H M R Hm Mk Dg |
|
3237 |
W IF-IC F |
H M R B |
|
|
Cadherin |
4073 |
W |
H M R |
|
4068 |
W IP IHC-P |
H M R Mk Dm Z B |
|
|
Na,K-ATPase |
3010 |
W |
H M R Hm Mk Z |
|
CD71 |
13113 |
W IP IF-IC F |
H |
|
13208 |
W IP IF-IC |
H |
|
|
82582 |
F |
H |
|
|
Caveolin-1 |
3267 |
W IP IHC-P IF-IC F |
H M R Hm Mk B Dg |
|
3238 |
W IP IHC-P IHC-F IF-IC F |
H M R Hm Z B Pg |
|
|
12506 |
W |
H M R Hm Mk B Dg |
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Sampler Kit 為了滿足你各種實驗的需要，CST 為您準備了含優(yōu)選貨號的內(nèi)參Sampler kit，性價比高，購買方便。 |
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|
9774 |
Loading Control Antibody Sampler Kit (Mouse) |
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|
4670 |
Loading Control Antibody Sampler Kit (HRP Conjugate) |
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|
5142 |
Loading Control Antibody Sampler Kit |
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參考文獻：
1. Yang, H.J. et al. (2010) Cancer Invest 28, 127-34.
2. Nollen, E.A. and Morimoto, R.I. (2002) J. Cell Sci. 115, 2809-2816.
3. Tewari, M. et al. (1995) Cell 81, 801-809.
4. Oberhammer, F.A. et al. (1994) J Cell Biol 126, 827-37.
5. Rao, L. et al. (1996) J Cell Biol 135, 1441-55.
6. Shimizu, S. et al. (1999) Nature 399, 483-7.
7. Condeelis, J. (2001) Trends Cell Biol 11, 288-93.
8. Toshima, J. et al. (2001) J Biol Chem 276, 31449-58.
9. Lim, Y.P. et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10, 3980-3987.
10. Communal, C. et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 6252-6256.
11. Du, J. et al. (2004) J. Clin. Invest. 113, 115-123.
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