實驗結(jié)果這么難重復(fù)，怎樣才能提高重復(fù)性呢？

剛開始做實驗的時候，有一次發(fā)現(xiàn)一篇文章所用的細胞，處理藥物和我現(xiàn)在的課題一模一樣。那么我想用文章中的處理時間及濃度是不是可以做出來同樣的結(jié)果？當時已經(jīng)很晚了，看我還沒走，一個前輩問我怎么還不回去。我說我正在重復(fù)一篇文章中的實驗，這時她意味深長的說了一句話：“重復(fù)別人的實驗？有時候你連自己做過的實驗可能都重復(fù)不出來！當時我聽后不以為然，心想：怎么可能連自己的實驗都重復(fù)不出來？那肯定是自己的實驗水平有問題唄。工作之后作為技術(shù)支持常接聽客戶咨詢電話，有客戶會電話進來表示實驗結(jié)果無法重復(fù)：即使用同樣的樣本、同樣的抗體，昨天可以做出來了，今天卻沒有條帶。有時候是抗體批次問題，換了個批次實驗就無法重復(fù)了。不僅我們普通實驗者，一些學(xué)術(shù)權(quán)威們也有這樣的困惑：耶魯大學(xué)某著名的病理學(xué)家曾用抗體開發(fā)了一個黑色素瘤治療的診斷試劑。但花費了大量的時間和金錢后，卻發(fā)現(xiàn)新的抗體無法重復(fù)之前的結(jié)果，原來這個抗體特異性存在問題，只能被迫停止了這個項目。因此近幾年來，很多學(xué)者都紛紛認為應(yīng)該重視起抗體的問題，同時也要求抗體行業(yè)進行自我約束。

為什么實驗結(jié)果很難重復(fù)呢？主要有5個方面的原因：1、參考文獻；2、生產(chǎn)商；3、經(jīng)銷商；4、搜索引擎；5、同行審閱。下面讓我們具體來看下這5個方面以及如何解決這幾方面帶來的困擾。

1、參考文獻：是我們選擇抗體的主要方式。當我們選擇抗體的時候，最常用的方法是聽取同行的推薦或者查閱參考文獻，看看別人用了什么得到了滿意的實驗結(jié)果。但是通常會遇到2個問題：當你用搜索引擎去搜尋抗體時，發(fā)現(xiàn)有的文章并沒有標明使用的哪個抗體；或者所查文獻標注使用了另一參考文獻的抗體，你又進一步查閱--——找了半天，卻發(fā)現(xiàn)最初的那個作者并沒有標明到底用了具體哪個抗體。所以有的參考文獻的缺點就是沒有抗體的具體信息。

在這種背景下，我們需要選擇性地參考參考文獻。一個簡單粗暴的方法，就是選擇那些影響因子比較高的文章，比如大于5分，可以在一定程度上保證當你Follow別人的實驗步驟時，有更大的可能重復(fù)出來；也可以選擇那些標注了抗體貨號、稀釋比例和生產(chǎn)廠家的文章，減少反復(fù)試驗各種抗體的時間。

2、用生產(chǎn)商的網(wǎng)站：有些公司號稱生產(chǎn)商，但是卻只生產(chǎn)極少量的抗體，絕大部分抗體是從其他公司OEM過來的，因此質(zhì)量參差不齊。有些公司不告訴客戶怎么驗證抗體，而讓用戶自己去檢測。有些公司雖然秀了數(shù)據(jù)，但是這些數(shù)據(jù)卻非常有限，僅僅是告訴你這個抗體可以用于何種應(yīng)用，并沒有說明到底檢測的是什么？是否有交叉反應(yīng)？往往我們抱怨比較多的是這些公司不提供完整的驗證抗體的數(shù)據(jù)，批次質(zhì)量不穩(wěn)定。

作為研究人員，一定要選擇重視抗體質(zhì)量的真正的生產(chǎn)商。CST一直以為科研人員提供最高質(zhì)量的抗體作為使命，在生產(chǎn)過程中非常重視抗體特異性、靈敏度、批次間一致性的檢測，并將驗證數(shù)據(jù)公布在網(wǎng)站上，對于大家選擇抗體非常有幫助。有些未公布的驗證失敗的數(shù)據(jù)，如果研究人員問詢，CST的研發(fā)科學(xué)家都非常樂意分享。這就是為什么CST能夠?qū)掖潍@得“最佳抗體”、“最有用的網(wǎng)站”、“最佳客戶服務(wù)”、“研究者的首選抗體”、“五個第一”等殊榮的原因。

選擇一個靠譜的廠家至關(guān)重要，其實從廠家所提供的產(chǎn)品說明書的詳細程度就可以來判斷這個廠家是不是可靠，詳細并不是說篇幅越長越好，而是看實驗種類是不是經(jīng)過驗證，有沒有提供實驗所需要的詳細試劑。CST所有的抗體都是經(jīng)過嚴格篩選和驗證的，實驗步驟都是經(jīng)過優(yōu)化的，我們希望客戶通過網(wǎng)站就可以發(fā)現(xiàn)更多產(chǎn)品的相關(guān)信息，而且我們花費了很多時間來優(yōu)化實驗方法，比如在WB一抗稀釋液這一步，到底是用脫脂奶粉稀釋還是BSA稀釋，可以看說明書下方的紅色方框，可能有時候差異不是很大，但很多時候差異還是很明顯的；在說明書右方也會提到具體的稀釋比例以及稀釋buffer，比如IHC到底是用檸檬酸鹽修復(fù)還是EDTA修復(fù)，在說明書上都可以看到，同時我們也有很多小冊子，像WB成功實驗指南，IHC實驗成功指南等等，而且還會檢測每一個批號，確保新的批號和舊的批號是一樣的實驗結(jié)果，對抗體的靈敏度、 特異性、反應(yīng)性、穩(wěn)定性方面都會做相關(guān)的測試。

3、經(jīng)銷商：當今科研市場，供應(yīng)商的競爭十分激烈，非正規(guī)的供應(yīng)商如果想走出一條活路，即使它沒有任何生產(chǎn)商的授權(quán)，也會轉(zhuǎn)賣很多公司的產(chǎn)品。有的供應(yīng)商缺乏專業(yè)的技術(shù)人員，對產(chǎn)品本身不了解，不能給客戶做出專業(yè)的正確的推薦；非正規(guī)的供應(yīng)商經(jīng)常從大的供應(yīng)商那里買來抗體，分裝后重新貼上標簽進行銷售；有的供應(yīng)商甚至直接出售假貨、以次充好，把產(chǎn)品拿過來分裝然后貼上知名產(chǎn)品的標簽。因為整個市場不透明，導(dǎo)致用戶所看到的產(chǎn)品信息，并不等同于生產(chǎn)商所提供的信息，最終導(dǎo)致科研人員買到質(zhì)量很差的產(chǎn)品甚至假貨。

作為研究人員，一定要擦亮眼睛，盡可能從生產(chǎn)商授權(quán)的代理商處購買。授權(quán)代理商可以從生產(chǎn)商的網(wǎng)站上查詢得到，也可以直接打電話給生產(chǎn)商詢問。詢問實驗室的老師和管理人員，尋找長期合作的可靠的代理商。點擊此處查看CST 授權(quán)代理商。

4、第三方產(chǎn)品平臺網(wǎng)站，比如CiteAb， Biocompare等，其實很多產(chǎn)品都是不斷更新的。排名最靠前，引用文獻最多的并不一定是這個供應(yīng)商最好的產(chǎn)品，而僅僅是生產(chǎn)最久的產(chǎn)品。

因此，除了看引用文獻最多的產(chǎn)品，還可以在平臺通過關(guān)鍵詞搜索，查看符合條件的多個產(chǎn)品，結(jié)合生產(chǎn)商網(wǎng)站上提供的驗證數(shù)據(jù)等進行綜合考量。就抗體而言，實驗多檢測來自于人、小鼠、大鼠的樣本，作為來自于更遠源種屬的兔單抗，其特異性和靈敏度更好，可優(yōu)先選擇。

5、同行審閱。往往發(fā)表文章的時候，不需要提供詳細的操作方法及全部的驗證數(shù)據(jù)?？赡苡行┮寻l(fā)表的實驗結(jié)果并沒有做3-5次的重復(fù)試驗，或者做了之后只是挑選了一幅滿意的圖片。

如果同行審閱們有更加嚴格的評審標準，比如讓用戶盡可能的提供詳細的產(chǎn)品貨號、稀釋比例及試驗步驟，或者有一個專門的網(wǎng)頁來上傳所有的原始圖片（用戶可以參考各出版社的網(wǎng)站，排版說明都有不同的要求，有些雜志還會有專門的網(wǎng)頁來存放這些圖片）供他人參考，不僅會促使整個學(xué)術(shù)界形成一種好的風(fēng)氣，也會減少實驗不可重復(fù)、造假等問題。

CST作為世界領(lǐng)先的抗體生產(chǎn)商，我們會一如既往地重視出廠前的抗體驗證，即特異性、靈敏度、批次間一次性的檢驗，研發(fā)生產(chǎn)抗體的科學(xué)家為大家提供最專業(yè)的技術(shù)支持，網(wǎng)站提供海量的驗證數(shù)據(jù)和信號通路、Phosphosite蛋白修飾數(shù)據(jù)庫等學(xué)術(shù)資源，為實驗的重復(fù)性貢獻我們的專業(yè)力量。我們的口號是“不要讓抗體成為您實驗的變量”，讓多方努力，共同提高整個試劑行業(yè)的可重復(fù)性。

除了上述這幾個宏觀方面，實驗重復(fù)性差還有其他方面的原因。如研究人員沒有嚴格遵循生產(chǎn)商的操作步驟，或者隨意改變實驗系統(tǒng)，使實驗變量增加。因此說，除了要有質(zhì)量非?？煽康目贵w，還需遵循生產(chǎn)商的操作步驟，選擇合適的模型，客戶的真實反饋等其他方面也同等重要，后續(xù)請繼續(xù)關(guān)注我們的文章，看看如何從微觀方面來提高實驗的可重復(fù)性。